細菌生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)時應根據(jù)細菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基,制定培養(yǎng)條件(溫度、pH值、時間,對氧的需求與否等)。一般操作步驟為先將標本接種于固體培養(yǎng)基上,做分離培養(yǎng)。再進一步對所得單個菌落進行形態(tài)、生化及血清學反應鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下,37℃中放18~24小時生長。厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2~3天后生長。個別細菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個月之久。
由于細菌無處不在,因此從制備培養(yǎng)基時開始,整個培養(yǎng)過程必須按無菌操作要求進行,否則外界細菌污染標本,會導致錯誤結(jié)果;而培養(yǎng)的致病菌一旦污染環(huán)境,就會引起交叉感染。
以疾病診斷為目的進行的培養(yǎng),要選擇合適的標本(血、尿、便、膿液、分泌物等),并應結(jié)合臨床情況解釋所得結(jié)果。
以光合細菌培養(yǎng)方法為例。光合細菌培養(yǎng)的方法,按次序分為容器、工具的消毒,培養(yǎng)基的制備,接種和培養(yǎng)管理四個步驟。
(一)容器、工具的消毒參考、此處從略。
(二)培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)用水
如果培養(yǎng)的光合細菌是淡水種,菌種培養(yǎng)可用蒸餾水,生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來水(或井水)配制。如果培養(yǎng)的光合細菌是海水種,則用天然海水配制培養(yǎng)基,注意在海水中加入磷元素時,不能用磷酸氫二鉀,應用磷酸二氫鉀,不然會產(chǎn)生大量沉淀。
2.滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。
3.培養(yǎng)基配制根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量,逐一溶解,混合,配成培養(yǎng)基。也可先配成母液,使用時按比例加入一定的量即可。
(三)接種培養(yǎng)基配好后,應立即進行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高,一般為20%~50%,即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1∶4~1∶1,不應低于20%,尤其是微氣培養(yǎng),接種量更應高些,否則光合細菌在培養(yǎng)液中很難占優(yōu)勢,影響培養(yǎng)的zui終產(chǎn)量和質(zhì)量。
(四)培養(yǎng)管理光合細菌的培養(yǎng)過程中,管理工作包括日常管理操作和測試,生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個方面。
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